0 引言

皮肤是机体的第一道防线，能够防止外界有害物质对机体的入侵以及阻止体内各种营养物质的流失，起到维持机体内环境稳态的屏障作用[1]。而皮肤受伤后，一般情况下，伤口暴露在外会引起细菌感染、水分和蛋白质流失、内分泌功能失调和免疫系统破坏、严重时还会引起一系列临床并发症。这种情况下，在伤口处覆盖伤口敷料使伤口处于一个利于愈合的微环境对于伤口的愈合和后期的临床治疗至关重要[2-3]。

理想的伤口敷料除了具有保持伤口环境的最佳湿度外，还具备避免伤口发生二次感染、可吸收伤口渗出液、减少伤口表面坏死、保持创面弹性、生物相容性良好等功能[4]。目前，在“湿性愈合理论”的支撑下，创面的治疗发生了革命性的变化。临床治疗中，泡沫敷料、高压敷料、负压敷料、胶原敷料、海藻酸钠敷料等主动型敷料(新型伤口敷料)已经逐渐取代了被动型敷料(如干纱布和油纱布等)[5-12]。

影响伤口愈合的因素有很多，而氧气则是影响伤口愈合过程中一种至关重要的因素，因此从氧气这一因素着手来探究含氧敷料对皮肤全层创伤的愈合效果。含氧敷料除了能为伤口提供必要的氧气之外，还有抑菌、保持创面湿润、隔热等促进伤口愈合的作用。目前，含氧敷料在国外已经被普遍应用，但在国内应用或者报道还较少。而小型猪的皮肤结构与人类的皮肤结构极为相似，且小型猪全层皮肤缺损创面模型制备简便、快速，创伤程度均一，是进行创伤愈合及外用药物对创面愈合影响研究的较理想模型。用此模型可进行创面面积、伤腔容积、愈合时间及创面组织的病理、生化及分子生物学分析[14]。因此试验选用巴马小型猪来制备动物模型并用含氧敷料来研究其对于皮肤全层创口的愈合效果，确定含氧敷料促进伤愈合的有效性，进而为在国内应用到人皮肤外科治疗奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验试剂、仪器与动物来源

1.1.1 主要试剂与仪器

阿托品、盐酸赛拉嗪注射液、异氟烷、含氧敷料(北京朗心睿明生物科技有限公司提供)、甲醛、特制致伤器、取材器、光学显微镜。

1.1.2 实验动物

巴马小型猪20 kg，9月龄(购自北京通和立泰生物科技有限公司)。饲喂北京科澳协力有限公司生产的标准化小型猪饲料，每头每天分2次供给其体重3%的饲料，自由饮水。

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型制备与分组

巴马小型猪3头术前禁食12 h，4 h禁水，然后称重，用0.05 mg/kg阿托品和0.1 mL/kg盐酸赛拉嗪注射液进行肌肉注射，待小型猪肢体活动稳定后，取俯卧位固定于手术台上。将呼吸面罩与麻醉呼吸机连接，吸入5%浓度的异氟烷进行麻醉诱导，当小型猪的四肢出现松弛、活动消失后，及时进行气管内插管术，使用浓度为0.5%异氟烷进行麻醉维持[15]。①伤口规划：在小型猪背部剃毛，面积为40 cm×25 cm，消毒完毕后以背部脊柱为正中线，在两侧各2 cm处由前至后各规划4个边长为5 cm的正方形创面，总共8个创面(图1A)。②取皮操作：用特制致伤器(直径18 mm打孔器)在规划好的区域进行取皮操作，垂直于皮肤向下钻至肌肉筋膜，抽出致伤器，剪去已钻掉的皮肤[14]，形成8个深达肌肉筋膜的正方形全层皮肤缺损创面(图1B)。③伤口包扎：将正中线左右两侧所制备的创面分别为空白对照组和实验组，空白对照组的创面用普通纱布进行包扎，实验组的创面则用含氧敷料进行包扎(图1C)。在术后0 d、7 d、14 d、21 d分别拍照，观察创口恢复情况。

图1 小型猪同体自身对照全层皮肤缺损创面(左侧为普通纱布包扎，右侧为含氧敷料包扎)

1.2.2 取样与HE染色

在术后0 d、7 d、14 d、21 d时用直径为1 mm的取材器在每个创面均匀取5个深至肌层的、直径为1 mm的柱状组织块，然后用10%甲醛溶液固定组织块，常规石蜡包埋、切片，进行苏木精-伊红(HE)染色[15]，显微镜观察组织切片并拍照。

1.2.3 CD31 免疫组化染色

分别取普通绷带和含氧敷料处理7 d、14 d、21 d猪全层皮肤，石蜡包埋并切片，石蜡切片脱蜡至水；3%H2O2室温孵育5～10 min，以消除内源性过氧化物酶的活性；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min，(如需采用抗原修复，可在此步后进行)； 5%～10%正常胎牛血清(PBS稀释)封闭，室温孵育10 min。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1～2 h；PBS冲洗，5 min×3次；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1%BSA-PBS稀释)，37℃孵育10～30 min；或滴加第二代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育10～30 min；PBS冲洗，5 min×3次；滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素(PBS稀释)，37℃孵育10～30 min；或第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10～30 min；PBS冲洗，5 min×3次；显色剂显色(DAB或AEC)；自来水充分冲洗，复染，封片，照相。

文章来源：《皮肤病与性病》 网址: http://www.pfbyxb.cn/qikandaodu/2021/0511/994.html